人结肠癌细胞（Caco-2）

△ Caco-2细胞（来源网络）

人结肠癌组织源细胞（Human Colon Cancer Cell）是指从机体取出后立即培养的细胞。人结肠癌组织源细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究，如蛋白质组学、基因组学、细胞株（系）研究、DNA、RNA和遗传学研究等，还可应用于当今热门的生物医药产业如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究等。人结肠癌组织源细胞在生物医药领域有不可替代的作用，市场前景广阔。

• 用于癌症研究，验证由细胞株研究获得的结果；

• 预测个体样本的反应和排斥性，从而选择更有效的抗癌药物；

• 筛选最具选择性或毒性的新药化合物；

• 作为识别靶标进行抗肿瘤药物筛选与模型建立等。

Caco-2细胞融合度达到80%-90%，细胞表现出特征性的肠上皮细胞分化，细胞可生长聚集成片，贴壁。Caco-2细胞表达维甲酸结合蛋白I和维甲酸结合蛋白Ⅱ，并呈角质蛋白阳性。

中奥天元推荐方案

无血清培养方案：

• BIO-MPM-1 SFM 无血清培养基（货号：05-060-1A）

• L-谷氨酰胺（货号：03-020-1B）

• 血小板裂解物（货号：PLTGOLD0100R）

培养基特点：BIO-MPM-1培养基是一种无血清培养基，用于培养贴壁细胞，使用前需添加2mM谷氨酰胺。培养基是不含白蛋白的，白蛋白对细胞生长是非必需的，在某些情况下甚至会阻止细胞进行有效的粘附，因此BIO-MPM-1的蛋白质含量小于30mg/L，培养基中除胰岛素外不含其他生长因子和激素，不包含附着因子，使用时建议添加2%的血小板裂解物。

血清培养方案：

• 上皮细胞完全培养基（货号：C3650-0100）

特点：此培养基为完全培养基，主要成分为：基础培养基、胎牛血清、谷氨酰胺、抗生素、细胞生长因子，且里面含促生长因子和大于10%的血清，使用方便，更适宜细胞增殖。

人绒毛膜滋养层细胞（Htr8）

△ Htr8（来源网络）

滋养层细胞是指具有滋养功能的细胞，来自胚胎外的滋养层。滋养层细胞生长迅速，在胚囊表面形成许多毛状突起，称“绒毛”（Villi）。被覆于绒毛膜绒毛的滋养细胞称“绒毛滋养细胞”。

滋养层开始只有一层扁平立方形细胞，当形成绒毛时，这层细胞逐渐分化为两层。内层和间质接触，以往称“郎汉斯细胞”，现称“细胞滋养细胞 (Cytotrophoblast)”。外层和子宫蜕膜接触，旧称“合体细胞”，今称“合体滋养细胞 (Syncytiotrophoblast)”。经更进一步了解正常滋养细胞具有某些独特的生物学特点，这些特点更接近于恶性肿瘤而非正常组织。

人绒毛膜滋养层细胞上皮样细胞呈多角形，尺寸更为规则，贴附在基质上呈散在斑片状生长，但较难贴壁。

中奥天元推荐方案

• RPMI-1640（货号：01-100-1ACS）

• 10%特级胎牛血清（货号：04-001-1ACS）

• 1%青链双抗（货号：03-031-1B）

人NK-T细胞

△ 人NK-T细胞（来源网络）

NK-T细胞(Natural Killer T Cell)是一种细胞表面既有T细胞受体TCR，又有NK细胞受体的特殊T细胞亚群。NK-T细胞能大量产生细胞因子，且可以发挥与NK细胞相似的细胞毒作用。

其主要特征为：

1. 共表达T细胞受体和NK细胞受体。经典NK-T细胞一般为CD4+和DN NK-T细胞。其中NK1.1是NK-T细胞最主要的表面标记。

2. TCR基因偏向性取用(Bias Usage)。与其它T细胞亚群相比，NK-T细胞具有独特的限制性表达TCR库。

3. 接受CD1d递呈的脂类抗原，在固有免疫中发挥作用。

4. NK-T细胞表达的是“半恒定的”TCRαβ肽链，意思是指TCRα链相对恒定，而TCRβ链具有多样性。例如，人NK-T细胞的TCRα链均表达Vα14/Jα18。

5. CD4和CD8的表达不均一。人NK-T细胞可能为CD4+CD8-、CD4-CD8+或双阴性CD4-CD8-细胞。

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• BIOTARGET-1单核细胞无血清培养基（货号：05-080-1A）

• L-谷氨酰胺（货号：03-020-1B）

BIOTARGET-1无血清培养基还含有典型的多种成分，其中包括：氨基酸、葡萄糖、无机盐、脂类、酚类、红维生素、微量元素。

BIOTARGET-1无血清培养基用来培养人类外周血中的单核细胞，如淋巴细胞或者周围血液中的单核细胞。该无血清培养基含人白蛋白和转铁蛋白，不含生长因子或激素（除了微量的生物合成的人重组胰岛素）。使用前需加入终浓度为2-4mM的L-谷氨酰胺。

人正常乳腺上皮细胞（MCF-10A）

△ MCF-10A细胞（来源网络）

MCF-10A培养条件是一种成团、贴壁生长的细胞，如果状态好的情况下，生长非常快，细胞形态是不太规则的三角形。

MCF-10A很难消化，消化时可用胰蛋白酶（货号：03-046-1B）进行消化，用FBS与PBS配制成中和液（FBS占10%），进行中和胰酶操作。此细胞需用无血清体系才能更好培养。

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• BIO-MPM-1 SFM 无血清培养基（货号：05-060-1A）

• L-谷氨酰胺（货号：03-020-1B）

• 血小板裂解物（货号：PLTGOLD0100R）

培养基特点：BIO-MPM-1培养基是一种无血清培养基，用于培养贴壁细胞，使用前需添加2mM谷氨酰胺。培养基是不含白蛋白的，白蛋白对细胞生长是非必需的，在某些情况下甚至会阻止细胞进行有效的粘附，因此BIO-MPM-1的蛋白质含量小于30mg/L，培养基中除胰岛素外不含其他生长因子和激素，不包含附着因子，使用时建议添加2%的血小板裂解物。

鼠胚胎干细胞

△ 小鼠胚胎干细胞（来源网络）

ES（Embryonic Stem Cell）细胞具有与早期胚胎细胞相似的形态结构，细胞核大，有一个或几个核仁，胞核中多为常染色质，胞质胞浆少，结构简单。体外培养时，细胞排列紧密，呈集落状生长。用碱性磷酸酶染色，ES细胞呈棕红色，而周围的成纤维细胞呈淡黄色。细胞克隆和周围存在明显界限，形成的克隆细胞彼此界限不清，细胞表面有折光较强的脂状小滴。细胞克隆形态多样，多数呈岛状或巢状。小鼠ES细胞的直径7μm～18μm。

小鼠ES细胞的分离方法基本成熟，且已广泛应用于生命科学研究的各个领域。1981年Evans首次分离得到小鼠ES细胞，他以手术切除受精后2.5d小鼠卵巢并结合激素注射干扰子宫环境，从而使胚胎延迟着床，再回收胚胎，将其体外培养于STO细胞滋养层上，结果得到了小鼠ES细胞系。Martin G R以免疫外科法剥离小鼠囊胚滋养层细胞，得到内细胞团（ICM）并将其置于STO细胞滋养层上，培养基为小鼠PSA-1 ES细胞条件培养基，结果也得到小鼠ES细胞。此后，Axelord等用微滴法得到小鼠ES细胞系；Kaufman等用单倍体延迟着床小鼠囊胚建立同源二倍体ES细胞系；Wobus等首次用原代小鼠成纤维细胞作滋养层建立了小鼠ES细胞系；Smith等首次使用大鼠肝细胞条件培养基作为分化抑制物建立了小鼠ES细胞系。Brook F A等进一步完善了小鼠ES细胞的分离方法，以致从许多品系小鼠包括近交系和突变系，都可获得ES细胞。分离小鼠ES细胞并非只能从囊胚，也并非必须依赖滋养层细胞。Dhhaise等将52枚8-细胞小鼠胚胎消化成单个分裂球并培养于小鼠原代成纤维细胞滋养层上，所用培养基为DMEM/F12，并添加100 mL/L的胎牛血清、100mL/L的新生犊牛血清和0.1mmol/L的2-巯基乙醇，5天后，出现多个干细胞集落，消化传代后建立了一个ES细胞系MSB1。将MSB1注入SCID（Severe Combined Immunodeficient Mice）小鼠，能产生包含三胚层分化物的畸胎瘤，注入52枚囊胚产生了2个活的个体（1雄，1雌），但雄性个体无生殖能力。Tojo等用同样方法从杂交小鼠（C57BL/6×DBA/2）8-细胞胚也得到了ES细胞。小鼠ES细胞具有无限增殖的自我更新能力。Suda Y等将小鼠ES细胞传250代以上没有出现转化的迹象，它们仍具有正常的二倍体核型；在生殖系嵌合体中能产生正常的配子；作为核供体能重组克隆胚胎。上述结果表明小鼠ES细胞是永生的 。

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无血清培养方案：

• NutriStem® hPSC XF, Xeno-Free medium（hPSC无血清培养基，货号：05-100-1A）

• Laminin 511（层粘连蛋白LN511，货号：LN511-0202）

NutriStem® hPSC XF, Xeno-Free medium for human ES & iPS Cell Culture, 开瓶即可使用的完全培养基，不含异源动物成分，添加了医疗级的人血清白蛋白（HSA：Human Serum Albumin），以适用于无滋养层培养法（Feeder-Free）。

血清培养方案：

• DMEM低糖（货号：01-051-1ACS）

• 10%金牌胎牛血清（货号：04-002-1）

• ESGRO白血病抑制因子（LIF）（60μl）

• β-巯基乙醇（1.5ml）

鼠原代正常肝细胞

△ 鼠原代正常肝细胞（来源网络）

将小鼠肝细胞分离出来,在体外环境中作培养,并进行研究是典型的细胞造模技术。分离出来的肝细胞可以进行多种研究如细胞形态学，细胞周期，蛋白表达，基因表达，多种药物及物理条件干预，RNA干扰等等。小鼠干细胞属常规的原代细胞培养，不过鼠原代肝细胞在体外大约增殖50-60代就会进入衰老期。小鼠原代正常肝细胞都可以稳定存活长达10天，几乎不增殖。细胞形态：上皮样，多边形，贴壁生长。1. 建议用鼠尾胶原或明胶包被培养皿2. 添加ITS3. 青链霉素，两性霉素B三抗4. 接种密度为2x105/cm2

中奥天元推荐方案

• DMEM高糖（货号：06-1055-57-1ACS）

• 10%金牌胎牛血清（货号：04-002-1A）

• 1% ITS（货号：C3210-0005/C3213-0005）

• 1%青链双抗（货号：03-031-1B）

ITS：Insulin-Transferrin-Selenite（ITS）通过补充常见营养物质，可以大幅度降低细胞对胎牛血清的需求。

在胎牛血清浓度低于4%的情况下，ITS或ITS-E都能促进各种贴壁细胞的生长。研究表明，下列所述补充成分能被大多数哺乳动物细胞所利用。它们能促进细胞增殖，降低多种细胞对血清的需求。据文献资料，细胞培养过程中，当ITS或ITS-E与2%-4%的血清一起使用时，可达到与添加10%血清相似的增殖效果。

1. VivaCell ITS使用人重组胰岛素，更有利于实验趋近于临床级。胰岛素作为一种多肽激素，对哺乳动物细胞具有多效合成作用，促进葡萄糖和氨基酸摄取、脂肪生成、单价阳离子和磷酸转运、蛋白质和核酸合成。

2. 临床级转铁蛋白推动实验更加科学合法，有助于实验经过严格的临床审批程序。转铁蛋白作为铁的载体，也有助于降低氧自由基和过氧化氢的毒性水平。

3. 亚硒酸盐是谷胱甘肽过氧化物酶和其他蛋白质的辅助因子，在培养基中作为抗氧化剂使用。

4. 乙醇胺在杂交瘤细胞的增殖中起重要作用，经常被添加用在培养这些细胞的补充剂中。

REFERENCES

1.  Barnes D, Serum-free animal cell culture. BioTechniques, 5: 534 (1987).

2.  Barnes D, and Sato G, Cell,22:649(1980).

3.  Wolpe, S.D., in Mammalian Cell Culture. J.P. Mather ed., Plenum Pres.

4. Kelley, D.S. et al., Effects of insulin, dexamethasone, and glucagon on the amino acid transport ability of four rat hepatoma cell lines and rat hepatocytes in culture. Cancer Res., 38, 4591-4601 (1978).

5. Guilbert, L.J., and Iscove, N.N., Partial replacement of serum be selenite, transferrin, albumin, and lecithin on haemopoietic cell culture. Nature, 263, 594-595 (1976).

6. Murikami, H. et al., Growth of hybridoma cells in serum-free medium: ethanolamine is an essential component. Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 79, 1158-1162 (1982).

7.  塔克·马可 玛丽·桑德斯．免疫应答导论：科学出版社，2012：194

8.  哺乳动物胚胎干细胞研究进展  ．中国知网[引用日期2019-11-09]