一篇文章帮您解决培养巨噬细胞所有的烦恼~

                                                                                       RAW264.7

                                                                                              小鼠单核巨噬细胞白血病细胞

刚接种半小时左右刚贴壁时细胞呈圆形，折光度很好，镜下观察如小珍珠状一个个地散落于培养皿中，培养一段时间后一小片一小片的生长，片片不相连。

                                                                                                                                       分化的RAW 264.7细胞

                                                                    被胰酶消化过的RAW264.7细胞表现出明显的分化现象呈多角形，有较长触角。

                         解决办法：刮取是比较合适的办法。把细胞培养液倒掉，加入37℃预温的PBS，然后刮细胞，食指和拇指夹紧细胞刮，细胞刮橡胶头刮面切面与平皿平行，

                                          用腕力轻轻地刮（注意用腕力，不要用臂力），切记只能刮一次，不要来回刮和反复刮，吹打的力度一定要轻，切勿暴力吹打。

                                                                                                                    更换血清批次后严重聚团的RAW 264.7

                       原因推断：血清来源于动物，其组成成分有1000种左右，且血清组成及含量常随供血动物的年龄、生理条件和营养条件而异。每个批号的组分百分比含量都是                                                  不固定的，所以批间差异是存在的。RAW 264.7细胞本身有聚团生长特性，但严重聚团可能受到血清里的某些因子刺激。

                       解决办法：先用血清试用装，试用效果好，可购买和血清试用装批次相同的正装，囤积半年或一年的用量，有效避免批间差对细胞的影响（胎牛血清在-20℃保

                                        存可达5年）。

                                                                                                                              个别分化的RAW 264.7细胞

                            培养时，无法保证100% 不分化，通过传代可以将分化比例控制在一定范围。RAW264.7细胞生长速度快，2-3天即可传一代， 传代时间间隔超过                                                                          3天很难吹下，每一次接种密度都要控制好。

                                                      解决办法：推荐传代比例为1:3-1:6；推荐传代时间：2-3天；推荐传代融合率：80%-90%。

                                                                                                                                                  RAW 264.7细胞

                                                            生长良好的RAW264.7 胞体边界感清晰，各个喂得圆鼓鼓、胖嘟嘟的，时刻准备着为人类生命科学研究而“献身”。

                                                                                                                             最后为大家普及一条知识~

                  热灭活可以灭活补体系统。启动的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，启动淋巴细胞和巨噬细胞活化。在免疫学研究中，培养ES                                                    细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。

                  热灭活时请将血清置于 56℃水浴30分钟。最好另加一个盛放与血清等体积水的烧杯并将温度计插入水中，以水中温度56℃为计时开始时间，加热过程中不时轻轻

                  旋转混匀血清。

                  实验显示，对大多数的细胞而言，不需要使用热灭活血清。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进或完全没有作用，造成细胞生长速率降低。同时沉淀物

                  会显著地增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察呈小黑点或絮状物，影响细胞观察。若非必须，不需要做热灭活处理。